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磷酸西他列汀( sitagliptin phosphate，1) 是一種新型抗 2 型糖尿病藥物，由默沙東公司研制開發(fā)，于2006 年 10 月經(jīng)美國(guó) FDA 批準(zhǔn)上市，是第 1 個(gè)用于治療 2 型糖尿病的二肽基肽酶 Ⅳ( DPP-4) 抑制劑類藥物。磷酸西他列汀治療 2 型糖尿病效果十分理想。作為一種新型抗糖尿病藥物，磷酸西他列汀具有血糖依賴性，降糖作用適中，在增加胰島素分泌的同時(shí)不會(huì)發(fā)生低血糖，有效減輕饑餓感等優(yōu)勢(shì)，且無(wú)惡心嘔吐、水腫及增加體質(zhì)量等副作用。
目前已報(bào)道的合成磷酸西他列汀的方法較多，概括起來(lái)主要有以下 2 種合成策略: 一是(R) -3-(叔丁氧羰基氨基) -4-( 2，4，5-三氟苯基)丁酸(8) 和 1，2，4-三唑并吡嗪(9)縮合，脫保護(hù)來(lái)制備磷酸西他列汀；另一種是二酮化合物 2 與 1，2，4-三唑并吡嗪(9) 縮合，經(jīng)烯氨化、不對(duì)稱催化氫化制備磷酸西他列汀， 最近默沙東公司報(bào)道了二酮化合物(2) 與 1，2，4-三唑并吡嗪(9) 的縮合物通過(guò)生物轉(zhuǎn)氨酶反應(yīng)一步合成磷酸西他列汀。
上述制備方法不同程度地存在原料成本高、反應(yīng)操作復(fù)雜、使用貴金屬催化劑、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)等缺陷。
呂承林等設(shè)計(jì)了一條新的合成路線：以 2，4，5-三氟苯乙酸為原料，與 2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮縮合得到二酮化合物2，2在甲醇中加熱脫羧得到-酮酯(3)，3 與 (S) -苯甘酰胺反應(yīng)得到手性烯胺(4)，4 經(jīng)硼烷/L-二苯基脯氨醇(CBS催化劑)不對(duì)稱還原得到一對(duì)非對(duì)映異構(gòu)體 5a 和 5b，其中，5a 經(jīng)切除手性輔助基、Boc 保護(hù)氨基、水解共 7 步反應(yīng)得到關(guān)鍵中間體(R) -3-( 叔丁氧羰基氨基)-4-(2，4，5-三氟苯基)丁酸(8) ，8 在 EDC 作用下與1，2，4-三唑并吡嗪縮合、 脫除 Boc 保護(hù)基制得目標(biāo)產(chǎn)物 1，總收率為33% ，整個(gè)合成路線如圖 1 所示。
經(jīng)查閱歐洲藥典及美國(guó)藥典得到磷酸西他列汀含量測(cè)定的色譜條件為：流動(dòng)相乙腈-1.36 g/L 磷酸二氫鉀-磷酸緩沖液（磷酸調(diào) pH 為2.0）（ 15∶85），流速 1.0 mL/min，柱溫 30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為 205 nm?？紤]到此流動(dòng)相其鹽溶液部分pH 為 2.0 過(guò)酸，可能會(huì)對(duì)色譜柱損害，故不予考慮。查閱相關(guān)文獻(xiàn)得磷酸西他列汀含量測(cè)定的色譜條件為：甲醇-0.1%高氯酸 (32∶68)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng) 268 nm。
將磷酸西他列汀對(duì)照品在上述色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣分析，其主峰保留時(shí)間約 30 min，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，多次更改甲醇-0.1%高氯酸比例及流速調(diào)整主峰保留時(shí)間，考察柱溫對(duì)色譜峰的影響，同時(shí)將磷酸西他列汀對(duì)照品按照紫外分光光度法在 200~350 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定其最大吸收波長(zhǎng)。最終得到磷酸西他列汀含量測(cè)定的色譜條件為：流動(dòng)相甲醇-0.1%高氯酸（45∶55），流速 0.8 mL/min，柱溫為 25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。
試驗(yàn)中調(diào)整甲醇-0.1%高氯酸比例制備供試品溶液，按照上述色譜條件于 0、 4、8、12 和 24 h 進(jìn)樣，觀察其主峰峰面積變化，考察其穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)磷酸西他列汀在甲醇-0.1%高氯酸任何比例的溶液中都較穩(wěn)定，其RSD值均小于 2.0 %，且進(jìn)樣分析時(shí)色譜峰峰形好。為方便實(shí)驗(yàn)操作，故采用流動(dòng)相作為磷酸西他列汀稀釋液溶解藥品。
經(jīng)查閱歐洲藥典得磷酸西他列汀片的溶出方法為：轉(zhuǎn)速 50 r/min，溶出介質(zhì)0.01 mol/L HCl(1000 mL)，溶出時(shí)間 30 min。查閱其他相關(guān)資料得磷酸西他列汀片的溶出方法為：轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)速100 r/min，溶出介質(zhì)水(900 mL)，溶出時(shí)間30 min。為了更好地考察磷酸西他列汀在不同 pH條件下的溶出行為，采用水、 0.01 mol/L HCl、PBS4.5及PBS6.8 作為 4 種溶出介質(zhì)；考慮到人體胃腸道的生理環(huán)境及蠕動(dòng)速度，擬定轉(zhuǎn)速為50 r/min。最終得到磷酸西他列汀片的溶出方法為：漿法，轉(zhuǎn)速 50 r/min，溶出介質(zhì)水、0.01 mol/L HCl、 PBS4.5 及PBS6.8（1000 mL），溶出時(shí)間60 min。
為使試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便易行，試驗(yàn)中采用紫外分光光度法進(jìn)行溶出樣品溶液的測(cè)定。由于采用紫外分光光度法測(cè)定樣品溶液的吸光度時(shí)，以樣品溶液的吸光度度數(shù)在 0.3~0.7之間為宜，試驗(yàn)中通過(guò)確定將溶出樣品溶液的濃度稀釋 5 倍，使其吸光度度數(shù)在 0.3~0.7 之間。
[1]呂承林,沈方亮,孫鑫哲,張興賢.2型糖尿病藥物磷酸西他列汀的合成[J].中國(guó)新藥雜志,2014,23(13):1574-1578.
[2]張金芬,周禹宏,李繼彬,邢正英,房志仲.磷酸西他列汀片的質(zhì)量控制[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2018,24(01):73-77.
[3]呂飛,歐陽(yáng)雪宇,李瑞豐,趙靜雪,魏永燕.涉及西他列汀的中國(guó)專利申請(qǐng)分析與預(yù)警[J].中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù),2015,10(03):280-285.