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編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1mL（亮黃色） |
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試劑三 |
非洲豬瘟病毒PCR引物混合液 |
100μL（白蓋） |
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試劑四 |
非洲豬瘟病毒PCR陽性對(duì)照（1×10E8 /μL） |
50μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊(cè) |
1 份 |
二、設(shè)置PCR反應(yīng)(40 μL 體系)：
3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分
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成份 |
N+2個(gè)樣品管 |
PCR陰性對(duì)照 |
PCR陽性對(duì)照 |
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PCR Magic Mix 3.0 |
各20μL |
20μL |
20μL |
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非洲豬瘟病毒PCR引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個(gè)樣品DNA模板 |
各18μL |
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PCR陰性對(duì)照（水） |
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18μL |
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PCR陽性對(duì)照（非洲豬瘟病毒PCR陽性對(duì)照1000倍稀釋液） |
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18μL |
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過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
PCR 產(chǎn)物陽 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
