1.取出培養(yǎng)瓶，打開瓶蓋，用吸管吸出舊的培養(yǎng)液。
2.用無 Ca2+ 、Mg 2+ 的平衡鹽溶液輕輕漂洗培養(yǎng)物1 次到 2 次，洗去殘余血清后棄去平衡鹽溶液。
3.在培養(yǎng)皿內(nèi)加入胰蛋白酶溶液， 室溫下消化 5min 到 15min 顯微鏡下觀察細胞突起縮回近似圓形、細胞之間的間隙增大時停止消化。
4.吸管吸去消化液后立即加入含血清培養(yǎng)液或蛋白酶抑制劑，抑制胰蛋白酶的活性，使消化終止。
5.用彎頭吸管吸取培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)液反復吹打瓶皿底壁，使已經(jīng)消化的細胞脫離瓶皿底壁。
6.低速離心，棄去上清液。
7.用新鮮培養(yǎng)液將細胞沉淀重新懸浮，計數(shù)并調(diào)整細胞密度。
8.根據(jù)傳代目的將細胞懸浮液接種到一個或多個新的培養(yǎng)器皿中。
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