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牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中最常用的培養(yǎng)基補(bǔ)充物之一。它作為一種成分復(fù)雜的混合物,可以為細(xì)胞提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子和多種促貼壁因子,從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖與存活。
胎牛血清是一種高度富含細(xì)胞生長(zhǎng)因子、激素和蛋白質(zhì)的補(bǔ)充物,因此在細(xì)胞培養(yǎng)中被廣泛用于促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。然而,它的成分復(fù)雜且批次間差異大,并存在攜帶病原體和引發(fā)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。
新生牛血清其主要特點(diǎn)是抗體(尤其是IgG)含量遠(yuǎn)高于胎牛血清。雖然它的生長(zhǎng)因子含量不如FBS豐富,但仍具有一定的促生長(zhǎng)能力。因此,它通常不適用于免疫細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞)的培養(yǎng),因?yàn)楦邼舛鹊目贵w會(huì)嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。NCS主要被用作一種經(jīng)濟(jì)高效的補(bǔ)充物,用于大規(guī)模或常規(guī)的細(xì)胞維持培養(yǎng),特別是那些生命力頑強(qiáng)、對(duì)血清質(zhì)量不敏感的細(xì)胞系
小牛血清是從小牛血液中提取的血清。它和FBS的主要區(qū)別在于,其生長(zhǎng)因子濃度較低,而免疫球蛋白(抗體)等大分子蛋白質(zhì)含量更高。這使得它的促增殖效果不如FBS強(qiáng)勁,因此常被用作一種經(jīng)濟(jì)型選擇,適用于培養(yǎng)對(duì)生長(zhǎng)因子依賴性較低的細(xì)胞系,或用于細(xì)胞的維持而非快速擴(kuò)增,例如在某些肌肉細(xì)胞和骨髓細(xì)胞的培養(yǎng)中。
成牛血清是從成年牛血液中提取,其“低生長(zhǎng)因子、高抗體”的特性最為顯著。與胎牛血清相比,它的生長(zhǎng)因子水平最低,而免疫球蛋白等總蛋白含量最高。這種成分特點(diǎn)使其不適合大多數(shù)細(xì)胞的增殖培養(yǎng)。因此,ABS在細(xì)胞培養(yǎng)中極為罕見(jiàn),它最常見(jiàn)的用途是憑借其高蛋白和低成本的優(yōu)勢(shì),在WesternBlot或ELISA等免疫分析實(shí)驗(yàn)中用作封閉液,以減少背景信號(hào)。
《中華人民共和國(guó)藥典》(2020版,三部)的定義:
新生牛血清:主要為滿足人用生物制品(如疫苗)生產(chǎn)的質(zhì)控要求。其定義為:“本品系取自出生后24小時(shí)內(nèi)未哺乳的新生牛的血液,經(jīng)分離、除菌過(guò)濾制成的液體。”這一嚴(yán)格規(guī)定旨在確保血清中的母源抗體含量極低。
《中國(guó)藥典》并未對(duì)其他類型的牛血清(如胎牛血清)設(shè)立獨(dú)立的通用標(biāo)準(zhǔn)。
《中華人民共和國(guó)獸藥典》(2020版)的定義:
新生牛血清:定義為:“本品系取自出生后14d內(nèi)未采食初乳的新生牛的血液,經(jīng)分離、除菌過(guò)濾制成的液體。”這里的時(shí)間范圍(14天)遠(yuǎn)長(zhǎng)于《中國(guó)藥典》的規(guī)定。
胎牛血清:定義為:“本品系無(wú)菌采集健康妊娠母牛屠宰時(shí)的胎牛血液,經(jīng)分離、除菌過(guò)濾制成的液體。”該定義較為寬泛,并未限定具體的胎齡或采集方法。行業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)為通過(guò)心臟穿刺采集的孕晚期胎牛血清質(zhì)量更優(yōu),但這屬于生產(chǎn)工藝的優(yōu)化,而非藥典的強(qiáng)制規(guī)定。
選擇優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商:為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性和可重復(fù)性,應(yīng)選擇信譽(yù)良好、質(zhì)控嚴(yán)格的血清供應(yīng)商,并索要其質(zhì)檢報(bào)告,確保產(chǎn)品無(wú)菌、無(wú)支原體、內(nèi)毒素含量低。
進(jìn)行批次測(cè)試:鑒于血清存在顯著的批次間差異,更換新批次血清前必須進(jìn)行測(cè)試。通過(guò)比較不同批次對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的生長(zhǎng)支持能力,篩選出最適合的批次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
正確儲(chǔ)存與使用:血清需在-20°C或以下避光凍存。為避免反復(fù)凍融破壞其有效成分,首次解凍后應(yīng)立即無(wú)菌分裝成單次用量,后續(xù)只取用分裝管,避免整瓶多次凍融。
綜上所述,牛血清并非簡(jiǎn)單的“細(xì)胞糧食”,而是一種高度可變的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)試劑。無(wú)論是胎牛血清的高效能,還是成牛血清的經(jīng)濟(jì)性,其選擇都必須與具體的細(xì)胞類型、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮唾|(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)緊密掛鉤。因此,深入理解不同血清的特性、嚴(yán)格遵守使用規(guī)范,并堅(jiān)持進(jìn)行批次篩選,這并非可有可無(wú)的附加步驟,而是確保實(shí)驗(yàn)科學(xué)性與可重復(fù)性的核心要求。