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ELISA的五種實驗原理及常見問題

  ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。
  
  ELISA試劑盒實驗常用的非離子型去污劑。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,在去除洗滌過程中的一些非異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用,ELISA試 劑盒因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會降低異結(jié)合,產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。
  
  1.雙抗夾心法:適用于大分子物質(zhì)的檢測。將已知的可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體表面,利用抗原抗體異性結(jié)合進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法,具有快速、靈敏、簡便等。
  
  2.競爭法:競爭法適用于較少表位的小分子物質(zhì)。將抗體包被于微孔板中,加入無關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點,加入標(biāo)準(zhǔn)品和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進行競爭結(jié)合。
  
  3.直接法:主要用于抗原的檢測,將抗原直接固定在固相載體上,洗滌后加入酶標(biāo)異性抗體,洗滌后加入底物顯色,該方法對抗體的異性要求較高。
  
  4.間接法:主要用于抗體的檢測。將異性抗原包被在固相載體表面,與標(biāo)本中相應(yīng)異性抗體結(jié)合,洗滌后加入酶標(biāo)的抗體,洗滌后加入底物顯色。該方法對抗原的異性要求較高。
  
  5.捕獲法:捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型的檢測。先將針對 IgM的第二抗體連接與固相載體,用以結(jié)合樣品中的所有 IgM,洗滌除去 IgG等無關(guān)的物質(zhì),然后加入異性抗原與待檢 IgM結(jié)合,再加入抗原異的酶標(biāo)抗體,后形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,加酶底物顯色即可對樣品中待檢 IgM是否存在及其含量進行測定。
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