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紀寧生物介紹Elisa實驗常見樣本—細胞

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ELISA試劑盒

細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。 需要注意的是: 因該類樣本干擾因素較多,如細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、ph、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等,所以可能存在檢測不到的情況。

目的物是分泌型,主要在胞外,即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本,細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單,取細胞培養(yǎng)上清,1000 × g 離心 20 分鐘,取上清即可檢測。

目的物主要存在于胞內(nèi),則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。

細胞裂解液:

貼壁細胞需要先用消化,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集);

將收集到的細胞用冷 PBS 洗3次;

物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞,再反復凍融):

超聲破碎:取適量PBS 重懸細胞,用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂;

反復凍融:將待破碎的細胞在-20℃以下冰凍,室溫融解,反復3次,使細胞溶脹破碎;

將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘,收集上清備用。

注: 一般情況下,物理方法如反復凍融,勻漿等方法會比化學方法好,因為化學方法會引入酸或堿,可能會對ELISA實驗產(chǎn)生影響。利用化學的細胞裂解液裂解細胞,如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應影響檢測效果,推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

樣本保存:

處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要,尤其注意不要反復凍融,樣本處理之后可分裝密封保存, 4 度保存應小于 1 周,-20 度不應超過 1 個月,-80度不應超過2個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫,不應加熱使之融解。

紀寧生物ELISA試劑盒品種多,質(zhì)量好,靈敏度高,以上是對常見細胞樣本處理方法整理,希望對您有所幫助。

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